Kandungan
Spectrophotometry adalah alat yang tidak ternilai dalam kimia dan biologi. Idea asas adalah mudah: bahan yang berbeza menyerap radiasi cahaya / elektromagnetik lebih baik pada beberapa gelombang daripada yang lain. Itulah mengapa beberapa bahan telus manakala yang lain berwarna, sebagai contoh. Apabila anda menyalakan cahaya panjang gelombang melalui penyelesaian, semakin tinggi kepekatannya, semakin banyak cahaya yang akan diserap. Untuk mengira kepekatan, anda perlu membandingkan bacaan anda dengan pembacaan untuk piawaian kepekatan yang diketahui. Prosedur di bawah adalah prosedur yang agak umum yang ditulis dengan makmal pengajaran kimia dalam fikiran, tetapi ia boleh diubah suai untuk tetapan lain juga.
Seperti biasa semasa bekerja di makmal, letakkan pada kacamata, sarung tangan dan kot lengan panjang untuk memastikan keselamatan anda sendiri.
Kencangkan mentol getah untuk mengosongkan udara, kemudian letakkan di atas pipet lulus anda dan biarkan mentol untuk berehat supaya ia menyedut air ke pipet. Seterusnya, keluarkan mentol itu, dan tutupkan bahagian atas pipet dengan jari anda; ini akan mengelak pipet supaya penyelesaian di dalamnya tidak mengalir sehingga jari anda dikeluarkan. Angkat tepi jari anda sedikit untuk membiarkan larutan sedikit mengalir keluar dari pipet, sehingga anda mencapai jumlah yang dikehendaki. Berlatih dengan beberapa air dan bikar untuk merasakan bagaimana pipet lulus bekerja. Pautan di bawah seksyen Resources mempunyai klip filem untuk menunjukkan kepada anda cara menggunakan pipet jika anda tidak pernah bekerja dengannya sebelum ini.
Label 5 tiub ujian sebagai standard 1-5. Anda boleh label mereka menggunakan pita pelekat dan pen atau menggunakan penanda memadam kering.
Pilih lima kepekatan untuk standard anda. Anda mahu kepekatan standard dipisahkan antara satu sama lain dengan kira-kira jarak yang sama - mis., 0.1 molar, 0.2 molar, 0.3 molar, dan sebagainya - dan dalam kira-kira julat yang sama seperti apa yang anda harapkan yang tidak diketahui anda. Pada masa ini, gunakan lima kepekatan berikut, tetapi ingat bahawa anda perlu mengubah suai ini apabila melakukan percubaan anda sendiri:
Standard 1: 0.1 molar Standard 2: 0.2 molar Standard 3: 0.3 molar Standard 4: 0.4 molar Standard 5: 0.5 molar
Seterusnya, ambil penyelesaian standard 1 molar dan tambahkan jumlah berikut untuk menguji tiub 1-5. Ingat, jumlah ini dikira menggunakan kepekatan yang disenaraikan di atas, jadi anda mungkin perlu mengubah suai mereka seperti yang diperlukan semasa melakukan eksperimen anda sendiri.
Standard 1: 0.8 mililiter Standard 2: 1.6 mililiter Standard 3: 2.4 mililiter Standard 4: 3.2 mililiter Standard 5: 4 mililiter
Bilas pipet lulus, kemudian pindahkan jumlah air berair yang berikut:
Standard 1: 7.2 mililiter Standard 2: 6.4 mililiter Standard 3: 5.6 mililiter Standard 4: 4.8 mililiter Standard 5: 4.0 mililiter
Pada dasarnya, idea ini adalah untuk membawa jumlah penyelesaian dalam setiap tiub sehingga 8 mililiter.
Cat setiap tiub piawai dengan parafilm dan tariknya ke campuran.
Tandakan lima lagi tiub ujian sebagai "Tidak diketahui 1-5." Menambahkan jumlah yang sama anda tidak diketahui atau penyelesaian ujian untuk setiap satu seperti yang anda gunakan dengan penyelesaian 1 molar untuk piawaian. Dalam erti kata lain, tidak diketahui 1 akan mengandungi 0.8 ml ujian larutan dan 7.2 ml air, tidak diketahui 2 akan mengandungi 1.6 ml ujian larutan dan 6.4 ml air, dan sebagainya.
Cat setiap yang tidak diketahui dengan parafilm, dan hati-hati membalikkan untuk campuran.
Hidupkan spektrofotometer dan biarkan ia panas. Tempoh masa yang diperlukan bergantung pada model dan pengilang.
Tetapkan panjang gelombang pada spektrofotometer. Panjang gelombang akan bergantung kepada jenis kimia dalam percubaan anda. Buat masa ini, anggap 500 nm, walaupun ingat bahawa anda perlu menukar ini untuk eksperimen yang berbeza.
Kalibrasi spektrofotometer anda. Prosedur penentukuran akan berbeza-beza bergantung pada peranti yang anda gunakan. Untuk Spectronic 20, model biasa dalam makmal pengajaran, anda akan menyesuaikan mesin terlebih dahulu supaya ia membaca "0 peratus T" apabila tiada cuvette dimuatkan, kemudian menyesuaikannya supaya ia berbunyi "100% T" apabila cuvette kosong mengandungi deionized air hanya dimuatkan. Prosedur ini mungkin berbeza-beza bergantung pada jenis mesin yang anda gunakan, jadi rujuk arahan pengeluar untuk butirannya.
Selepas mesin dikalibrasi, ambil tiub ujian standard 1 dan tuangkan kandungan itu ke dalam cuvette bersih sehingga mereka mencapai garis pengisi. Lap cuvette dengan kimwipe untuk mengeluarkan sebarang jari atau kotoran lain. Masukkan cuvette ke dalam spektrofotometer dan catat bacaan "% T".
Ulangi prosedur ini untuk semua 10 sampel. BERHENTI mencuci cuvette antara sampel untuk memastikan keputusan anda adalah setepat mungkin.
Ambil keputusan untuk standard anda dan masukkannya ke dalam program hamparan / grafik seperti Excel atau OpenOffice.
Dengan menggunakan program spreadsheet, jadikan 100 peratus setiap nilai "T" untuk piawaian, kemudian ambil log hasilnya. Pengiraan ini akan memberi anda penyerapan. Jika anda memasukkan formula, program spreadsheet anda akan melakukan pengiraan untuk anda.
Contoh: Jika% T adalah 50.6, formula yang anda masukkan ke dalam program spreadsheet adalah seperti berikut:
log (100 / 50.6)
Program spreadsheet akan melakukan aritmetik.
Lakukan perkara yang sama untuk semua lima nilai tidak diketahui / eksperimen.
Grafik nilai-nilai penyerapan untuk semua lima standard, dengan tumpuan pada paksi-x dan penyerapan pada paksi-y. Menggunakan program spreadsheet, muat persamaan linear kepada graf ini. Persamaan akan menjadi bentuk y = mx + b. Kebanyakan program spreadsheet akan mempunyai fungsi regresi linier. Rujuk manual pengguna untuk program hamparan anda untuk maklumat tentang cara menggunakan ciri regresi linier.
Ambil persamaan untuk garis yang paling sesuai dari program spreadsheet anda dan selesaikannya dengan y dengan menolak b dari kedua-dua pihak dan membahagikan kedua belah pihak dengan m. Hasilnya akan kelihatan seperti berikut:
(y - b) / m = x
di mana b dan m adalah nilai yang dijumpai oleh program hamparan anda.
Semak nilai penyerapan anda untuk yang tidak diketahui, dan pilih tiga yang jatuh dalam julat yang sama dengan piawaian. Gunakan ketiga-tiga nilai penyerapan ini untuk pengiraan yang tinggal anda. Jika semua lima jatuh dalam julat yang sama dengan piawaian, anda boleh menggunakan semua lima, tetapi anda perlu menggunakan sekurang-kurangnya tiga.
Pasangkan setiap tiga nilai serapan ke dalam persamaan anda di tempat y. Ingat bahawa persamaan anda adalah dalam bentuk berikut:
(y - b) / m = x
Jadi, anda mahu memasukkan nilai penyerapan bagi setiap yang tidak diketahui ke persamaan di tempat y, kemudian hitung x. Anda boleh menggunakan program spreadsheet untuk melakukan pengiraan ini untuk anda dan membuatnya lebih cepat. Anda kini telah mengira kepekatan kimia yang menarik dalam tiga daripada anda yang tidak dikenali dicairkan. Penyelesaian asal dicairkan untuk menyediakan yang tidak diketahui ini, walau bagaimanapun, sehingga sekarang anda perlu bekerja mundur dan menghitung konsentrasi larutan asal berdasarkan faktor pencairan.
Setiap sampel tidak diketahui yang anda masukkan ke dalam spektrofotometer dicairkan dengan jumlah yang berbeza. Akibatnya, kini anda harus membahagikan kepekatan yang telah anda perolehi berdasarkan penyerapan untuk setiap bacaan yang tidak diketahui oleh yang berikut:
Tidak diketahui 1: Dibahagikan dengan 0.1 Tidak diketahui 2: Dibahagikan dengan 0.2 Tidak diketahui 3: Dibahagikan dengan 0.3 Tidak diketahui 4: Dibahagikan dengan 0.4 Tidak diketahui 5: Dibahagikan dengan 0.5
Ingatlah, bagaimanapun, bahawa angka-angka ini didasarkan pada andaian menggunakan pengenceran yang digariskan di atas. Ingatlah untuk menukar nilai-nilai ini jika anda mencairkan sampel anda dengan jumlah yang berbeza.
Tambah hasil anda bersama-sama, dan bahagikannya dengan bilangan keputusan. Ini akan memberi anda purata. Laporkan nombor ini sebagai penemuan anda untuk kepekatan penyelesaian asal.