Kandungan
Gel elektroforesis adalah kaedah yang digunakan dalam makmal untuk mengukur dan menyusun helai DNA. Ia adalah perlu kerana DNA dalam keadaan normal terlalu kecil untuk dimanipulasi, walaupun dilihat menggunakan kebanyakan mikroskop. Makmal elektroforesis gel menggunakan prosedur yang agak lurus, dan teknik asas yang sama boleh digunakan untuk memisahkan protein individu.
The Matrix Gel
Untuk memulakan prosedur elektroforesis gel, anda mesti membuat gel terlebih dahulu. Biasanya, gel dibuat dalam kepingan nipis menggunakan bahan yang dipanggil agarose. Agar serbuk diletakkan di dalam satu botol, diikuti dengan larutan air garam yang dipanggil buffer. Campuran agarose dan penyangga ini dipanaskan sehingga kedua-dua bahan mencairkan bersama-sama, kemudian dicurahkan ke acuan pembentuk. Alat yang dipanggil sikat kemudian diletakkan pada satu hujung acuan sebelum gel sejuk. Apabila gel disejukkan, sikat dikeluarkan, meninggalkan slot kecil yang akan digunakan untuk memegang sampel DNA.
Ciri khas campuran agarose yang disejukkan (dipanggil matriks gel) berpunca dari fakta bahawa ia dicipta dengan air garam. Apabila elektrik, matriks akan menjadi konduktif, yang membolehkan aliran elektrik mengalir sepanjang panjangnya. Satu lagi ciri khas gel matriks ialah kehadiran lubang-lubang yang biasa dan mikroskopik. Lubang-lubang ini akan membolehkan helai DNA bergerak melalui matriks gel dan memudahkan proses penyisihan.
Dewan Elektroforesis
Langkah seterusnya ialah mencipta ruang elektroforesis. Ini adalah kotak kecil segi empat tepat, berwayar dengan sambungan elektrik positif dan negatif pada kedua-dua hujungnya. Chambers biasanya cetek, cukup kecil untuk disesuaikan dengan meja, dan dibina dari bahan yang jelas seperti Plexiglas.
Larutan air garam dicurahkan ke bahagian bawah ruang elektroforesis, dan matriks gel ditenggelamkan sedikit dalam larutan ini. Air garam berfungsi dua tujuan: membantu aliran elektrik dan mengekalkan matriks gel lembap. Oleh kerana DNA didorong oleh caj negatif, letakkan matriks anda supaya sampel anda akan terletak bersebelahan dengan sambungan elektrik negatif anda.
Menyediakan DNA
Sampel DNA kemudian disediakan. Oleh sebab DNA dalam penyelesaian adalah mustahil untuk dilihat, agen pewarna yang dipanggil penampan beban ditambah kepada setiap sampel individu. Ejen ini juga menebalkan penyelesaian DNA, menjadikannya kurang berair dan lebih berkesan. Menggunakan pipet, alihkan sampel penyelesaian DNA ke dalam setiap slot ganti dalam matriks gel. Dalam slot kosong di antara setiap sampel, letakkan beberapa penyelesaian DNA yang panjangnya anda ketahui (dipanggil standard DNA) untuk kawalan eksperimen dan perbandingan.
Hidupkan Kuasa
Sekarang, aktifkan ruang elektroforesis anda. Di bawah kuasa negatif, sampel DNA anda akan dipaksa melepasi panjang ruang. Struktur DNA kecil akan bergerak dengan lebih cepat melalui matriks gel, dan dalam masa yang singkat, mereka akan memisahkan diri dari helaian yang lebih panjang dan lambat. Pewarna dalam ejen pewarna membolehkan anda mengikuti jejak DNA. Anda tidak dapat melihat helai DNA individu, tetapi helai panjang yang sama akan bergumpal bersama.
Langkah Akhir
Apabila DNA diasingkan, matriks dikeluarkan dari ruang elektroforesis. DNA kemudiannya berwarna untuk membolehkan pengukuran dan pemeriksaan yang lebih mudah.