Kandungan
Kromatografi cecair prestasi tinggi (HPLC) adalah teknik makmal yang digunakan untuk memisahkan dan mengenal pasti sebatian. Ini adalah jenis kromatografi lajur yang bergantung kepada polariti sebatian yang berlainan dalam penyelesaian untuk memisahkannya. HPLC berbeza daripada kromatografi lajur piawai kerana menggunakan tekanan untuk memaksa penyelesaian melalui lajur dengan lebih cepat, dan dengan itu menghasilkan lebih cepat, dan kadang-kadang lebih tepat, hasilnya. Matlamatnya adalah untuk memisahkan sebatian dalam lajur dan minta mereka keluar secara berasingan.
Coelution
Kerana kelajuan HPLC dan bergantung kepada polariti yang berbeza sebatian, dua sebatian dengan struktur dan kutub yang sama dapat keluar dari peralatan kromatografi pada masa yang sama atau hampir pada masa yang sama. Ini dikenali sebagai coelution. Pembuatan membuat menentukan dengan tepat bahagian mana campuran yang dielakkan pada titik apa yang sukar.
Sebatian Adsorbed
HPLC biasanya menggunakan lajur kaca yang dipenuhi dengan manik-manik yang diperbuat daripada bahan yang berbeza. Campuran yang dipaksa melalui lajur mempunyai bahan kimia yang mengikat dengan kekuatan yang berbeza pada manik-manik. Kekuatan mengikat, yang bergantung pada kesamaan dalam polaritas, menentukan berapa lama bahan kimia akan mengikat pada manik sebelum dibebaskan. Sesetengah sebatian mengikat begitu kuat bahawa ia pada dasarnya tidak pernah dilepaskan dari manik-manik dalam lajur dan tidak pernah diukur dalam larutan keluar dari lajur.
Kos
Teknik pemisahan makmal biasa melibatkan membangunkan ujian, atau kaedah pemisahan, dan kemudian melaksanakan ujian tersebut untuk memisahkan sebatian individu dari larutan. Walau bagaimanapun ini biasanya menghasilkan pelbagai penyelesaian yang juga perlu menjalani prosedur, yang membawa kepada peningkatan eksponen dalam kerumitan. Walaupun HPLC sering menyederhanakan dan mempercepatkan proses ini, kos membangunkan alat HPLC boleh menjadi sangat luar biasa. Membangunkan alat HPLC, walaupun jauh lebih cekap, jauh lebih mahal daripada membangunkan ujian lain untuk memisahkan sebatian. Ini menjadikannya tidak berdaya maju untuk banyak makmal swasta yang kecil.
Kerumitan
HPLC bukan sahaja digunakan untuk memisahkan sebatian mudah, ia juga digunakan untuk mengasingkan protein tertentu daripada campuran selular. Dalam kes ini, manik-manik dalam lajur biasanya dilapisi dengan antibodi yang khusus untuk protein yang anda perlukan untuk mengumpul. Protein mengikat antibodi dan penyelesaian yang tersisa diteruskan melalui lajur, maka protein dilepaskan menggunakan penyelesaian lain dan dikumpulkan. Ini memerlukan seorang juruteknik yang berkemahiran tinggi untuk memantau lajur pada setiap masa dan pastikan proses berjalan seperti yang dirancang.