Kandungan
Enzim adalah protein yang berfungsi untuk menurunkan tenaga pengaktifan dalam reaksi kimia semasa tidak dimakan dalam tindak balas. Secara biologi, enzim adalah molekul penting yang mempercepat reaksi dalam sistem metabolik. Akibatnya, kinetika enzim mengkaji kadar reaksi enzim dalam pelbagai tetapan kimia. Banyak faktor yang mempengaruhi kelajuan enzim. Kepekatan substrat, suhu, perencat dan pH mempengaruhi ambang enzim dalam tindak balas kimia. Dengan bantuan hubungan linear seperti plot Lineweaver-Burk, anda boleh mencari kadar maksimum enzim.
Kemudahan Mengira Vmax dalam Plot Lineweaver-Burk
Mulakan dengan merancang persamaan Michaelis-Menten untuk mendapatkan lengkung hiperbola. Kemudian, gunakan persamaan persamaan Michaelis-Menten untuk mendapatkan bentuk pencerapan aktiviti enzim. Seterusnya, anda akan mendapat kadar aktiviti enzim sebagai 1 / Vo = Km / Vmax (1 /) + 1 / Vmax, di mana Vo adalah kadar permulaan, Km ialah pemisahan berterusan antara substrat dan enzim, Vmax adalah maksimum kadar, dan S adalah kepekatan substrat.
Oleh kerana persamaan slope-intercept mengaitkan kadar ke kepekatan substrat, anda boleh menggunakan rumus tipikal y = mx + b, di mana y ialah pembolehubah bergantung, m ialah cerun, x adalah pembolehubah bebas, dan b ialah penahanan y. Sebelum perisian komputer tertentu, anda akan menggunakan kertas graf untuk melukis garis. Kini, anda menggunakan perisian pangkalan data tipikal untuk merancang persamaan. Oleh itu, mengetahui kadar awal, Vo, dan pelbagai kepekatan substrat, anda boleh membuat garis lurus. Plot garis mewakili cerun Km / Vmax dan intersepsi y 1 / Vmax. Seterusnya, gunakan timbal balik dari y-intercept untuk mengira Vmax aktiviti enzim.
Kegunaan untuk Lineweaver-Burk Plot
Inhibitor mengubah kadar maksimum aktiviti enzim terutamanya dalam dua cara: kompetitif dan tidak kompetitif. Inhibitor yang berdaya saing mengikat tapak pengaktifan enzim yang menyekat substrat. Dengan cara ini, inhibitor bersaing dengan substrat untuk mengikat tapak enzim. Membolehkan konsentrasi tinggi pesaing berdaya saing memastikan pengikatan di tapak. Oleh itu, perencat persaingan mengubah dinamik kadar enzimatik.Pertama, perencat mengubah cerun dan x-jarak kilat Km mencipta cerun yang lebih curam. Walau bagaimanapun, kadar maksimum, Vmax, tetap sama.
Sebaliknya, perencat bukan bersaing mengikat di tapak yang berbeza daripada tapak pengaktifan enzim dan tidak bersaing dengan substrat. Inhibitor mengubah komponen struktur tapak pengaktifan yang menghalang substrat atau molekul lain dari mengikat ke tapak. Perubahan ini memberi kesan kepada afiniti substrat kepada enzim. Inhibitor noncompetitive mengubah cerun dan intersepsi y dari plot Lineweaver-Burk, menurunkan Vmax sambil meningkatkan lencongan y dengan cerun curam. Walau bagaimanapun, x-pencegahan tetap sama. Walaupun plot Lineweaver-Burk berguna dalam banyak cara, plot garis mempunyai batasan. Malangnya, plot itu mula mengganggu kadar pada kepekatan substrat yang sangat tinggi atau rendah, mewujudkan ekstrapolasi di plot.