Kandungan
Mengira titer untuk virus adalah cara rumit untuk mengatakan bahawa saintis menghitung bilangan virus dalam sampel tertentu. Untuk menghitung tititer virus, ahli sains menjangkiti plat bakteria yang semakin meningkat dengan penyelesaian virus pada kepekatan yang berbeza-beza dan mengetahui jumlah virus dalam penyelesaian asal dengan mengira bakteria yang telah mati akibat jangkitan virus.
Pengecutan Serial
Pakai sarung tangan, isi 10 tiub kultur dengan 9 ml sup dan labelkannya "10 ^ -1," "10 ^ -2", "10 ^ -3," dan sebagainya sehingga "10 ^ -10." Tiub ini akan digunakan untuk pencairan siri virus yang digunakan untuk mengira titer phage. Oleh kerana virus boleh berkembang menjadi kepekatan yang sangat tinggi, anda perlu mencairkannya untuk mengira dengan berkesan. Setiap tiub mewakili pengenceran sepuluh kali ganda virus.
Ambillah 1 ml kebudayaan virus yang anda ingin menghitung titer phage dan hantar ke tiub bertajuk "10 ^ -1" dengan pipet. Campurkan tabung dengan baik. Ini adalah pencairan sepuluh kali ganda pertama anda.
Ambil 1 ml dari budaya campuran dari tiub anda yang berlabel "10 ^ -1" dan pindahkannya dengan pipet baru ke tiub seterusnya, yang dilabel "10 ^ -2." Campurkan tiub ini juga.
Teruskan corak ini untuk mencipta siri pencairan bersiri. Anda akan berakhir dengan 9 tiub 9 ml dan 1 tiub 10 ml. Beban viral dalam tiub anda akan dicairkan di mana saja dari 10 kali (tiub pertama anda) atau 100 kali (tiub kedua anda) hingga sepuluh bilion kali (tiub akhir anda).
Menyediakan Plat untuk Mengira Titer
Ambil 10 tiub tryptone lembut agar dan 10 plat Petri dan labelkannya untuk sesuai dengan tiub pencairan bersiri anda.
Keluarkan topi supaya mereka tidak melepaskan di dalam haba dan kemudian letakkan tiub agar anda dalam bikar air mendidih. Ini akan mencairkan agar supaya anda boleh mencurahkannya ke dalam plat Petri.
Pindahkan tiub anda ke tab mandi air panas setinggi minimum 45 darjah Celsius. Ini akan memastikan bahawa agar anda tidak menguatkan di dalam tiub sebelum anda mempunyai peluang untuk mencurahkannya ke dalam hidangan Petri.
Tambah dua titis bakteria ke agar anda dan kacau dengan lembut. Ini adalah bakteria yang akan dibunuh, yang membolehkan anda untuk mengira bilangan zarah virus dalam larutan tertentu.
Tambah 1 ml setiap pencairan bersiri untuk tiub agar yang sepadan manakala tiub masih dalam mandi air panas. Sebagai contoh, 1 ml pelarasan serat 10 ^ -1 anda harus masuk ke dalam tiub agar dilabel "10 ^ -1."
Campurkan setiap tiub dan kemudian tuangkan setiap tiub ke dalam plat Petri dengan label yang sama. Ini akan membentuk lapisan nipis yang telah disuntik dengan bakteria dan virus dalam setiap plat. Biarkan plat tumbuh semalaman dalam inkubator.
Mengira dan Mengira Titer Virus
Ambil pinggan anda dari inkubator dan periksa mereka. Anda perlu melihat kawasan yang mendung di seluruh plat di mana bakteria telah berkembang, kecuali tempat yang jelas kecil yang disebut plak. Plak ini adalah tompok bakteria mati, dan setiap plak mewakili satu virus.
Cari plat yang mempunyai antara 30 dan 300 plak dan hitung bilangan plak tepat pada plat itu.
Ambil bilangan plak di plat anda dan kalikan dengan 10. Jika anda mengira 157 plak, anda akan mendapat 1570.
Majukan nombor yang anda dapat pada langkah sebelumnya dengan sebaliknya dari nombor pada tiub pencairan anda. Sebagai contoh, jika plat yang anda pilih adalah plat 10 ^ -5, anda akan melipatgandakan 1570 dengan 10 ^ 5 untuk mendapatkan 157000000. Nombor akhir ini adalah titer phage anda, dan mewakili bilangan virus setiap ml budaya asal anda.