Kandungan
DNA
Asid deoxyribonucleic dan protein. DNA diorganisasikan ke dalam unit-unit yang dipanggil gen, masing-masing kod untuk urutan tertentu RNA atau protein. Gen diteliti untuk mengetahui struktur dan fungsi biologi, evolusi, penyakit dan banyak aspek lain dalam sistem hidup. Untuk mempelajari gen secara terperinci, DNA mesti diasingkan dan disucikan dari sel-sel yang menarik.
Pengekstrakan DNA
Walaupun DNA dari satu sel boleh diekstrak dan dipelajari, tidak cukup untuk melihat dengan mata kasar. Untuk mendapatkan kuantiti cukup untuk spooling, lebih banyak sel yang anda perlu bekerjasama dengan lebih baik (banyak berjuta-juta).
Protokol yang tepat berbeza-beza untuk mengambil kira ciri-ciri unik sampel spesifik, tetapi langkah-langkah umum adalah homogenization, lysis, pencernaan, pemisahan dan pengumpulan. Prosedur yang terbaik dilakukan dengan kecil (bergantung kepada saiz sampel) kaca atau tiub plastik.
Sampel biasanya dicampur atau digali dengan teliti untuk memisahkan sel-sel secara menyeluruh dari satu sama lain. Ini menjadikan bahan-bahan sel lebih mudah diakses oleh reagen yang diikuti. Detergen atau enzim kemudiannya ditambah kepada homogenat untuk membekalkan membran sel (dan membran nuklear jika sel-sel adalah eukariotik) untuk membebaskan DNA. Pada ketika ini, DNA dikelilingi oleh protein, lipid, karbohidrat --- semua yang terkandung di dalam sel.
Pencernaan enzim lain mungkin diperlukan untuk memecahkan protein supaya mereka tidak mengikat DNA dan mengganggu pengumpulannya. DNA dipisahkan dari seluruh kandungan sel dengan menambah sejuk, tulen, etil atau isopropil alkohol. DNA tidak boleh larut dalam alkohol ini sehingga ia akan memendekkan untuk meminimumkan hubungannya dengan alkohol. DNA terkumpul kemudian dikumpulkan, biasanya dengan sentrifugasi --- atau spooling.
Spooling DNA
Pengumpulan DNA dengan spooling berkesan apabila sejumlah besar DNA diperoleh daripada prosedur pengekstrakan. Ia juga merupakan satu kaedah demonstrasi yang sangat baik kerana kusut DNA tulen yang jelas kelihatan jelas.
Untuk melipatgandakan DNA langkah pemisahan mesti dilakukan dengan teliti. Sekiranya ia bukan sebahagian daripada campuran reaksi lisis yang sebelum ini ditambahkan, penyelesaian garam tertumpu (natrium klorida) mesti ditambah kepada larutan sebelum langkah tambahan alkohol. Alkohol sejuk perlahan dituangkan ke tepi tiub ujian untuk membentuk lapisan di atas larutan akueus, mengelakkan pencampuran. Jika dilakukan dengan betul, alkohol akan membentuk lapisannya sendiri di atas lapisan masin. Kemudian datang spooling.
Untuk mengumpul DNA dari lapisan masin, hati-hati letakkan batang kacau kaca walaupun lapisan alkohol sehingga ia menyentuh bahagian bawah tiub. Perlahan-lahan putar batang di antara jari-jari, sambil menonton antara muka antara dua lapisan. Sekiranya terdapat DNA yang mencukupi, ia akan berganding bahu di antara muka antara lapisan untuk membentuk jisim lut susu. Spin batang untuk membalut DNA di sekitarnya (iaitu bahagian spooling) dan tarik keluar tiub. DNA boleh dipindahkan ke tabung lain alkohol tulen untuk penyimpanan atau analisis selanjutnya.