Kandungan
- Etilenediaminetetraacetate untuk pembersihan DNA
- Magneisum Chloride untuk Peningkatan DNA
- Ethidium Bromide untuk Pengwarnaan DNA
Analisis DNA melibatkan pelbagai jenis eksperimen molekul dan prosedur biologi. DNA adalah bahan mentah yang rapuh dan rumit, jadi pengendalian dan menganalisisnya memerlukan penyediaan bahan kimia yang berkualiti dan paling baik. Bergantung kepada analisis, beratus-ratus bahan kimia, daripada penyelesaian berasid dan asas kepada buffer dan pewarna, terlibat dalam kajian DNA. Memahami mengapa beberapa bahan kimia digunakan adalah penting untuk melakukan eksperimen yang berjaya dan mendapatkan keputusan yang tepat, boleh dipercayai dan boleh dihasilkan.
Etilenediaminetetraacetate untuk pembersihan DNA
Tiga jenis DNA disucikan untuk kerja saintifik: DNA dari genom (genomic DNA), keseluruhan DNA dari sel (total DNA) atau dari plasmids, yang boleh membiak sendiri. Pembersihan DNA sel jumlah menggunakan bahan kimia yang membolehkan pemusnahan sel banyak membran semasa sel lysis. Etilenediaminetetraacetate kimia (EDTA) sering digunakan untuk mengambil ion magnesium, yang diperlukan untuk mengekalkan keteguhan dinding sel, menyebabkan ini melemahkan sehingga mereka runtuh atau lusuh, melepaskan kandungan sel dan DNA untuk analisis. Di samping itu, EDTA melindungi dan memelihara integriti DNA dengan menghalang enzim yang biasanya terdapat di dalam sel, yang boleh memecah-belah DNA dan menjadikannya tidak dapat digunakan.
Magneisum Chloride untuk Peningkatan DNA
Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah analisa yang canggih yang digunakan untuk menguatkan beberapa ribu salinan molekul DNA, namun ia penuh dengan masalah teknikal dan ketidaktepatan. Oleh itu, banyak saintis, secara rutin melakukan beberapa set PCR yang berbeza untuk mencari keadaan dan parameter yang paling optimum untuk gen tertentu yang menarik. Satu bahan kimia yang digunakan untuk menjalankan pengoptimuman itu adalah magnesium, yang menstabilkan enzim polimerase DNA yang digunakan dalam PCR dan bertindak sebagai faktor penting untuk aktiviti enzim. Untuk PCR, magnesium digunakan dalam bentuk buffer magnesium klorida.
Ethidium Bromide untuk Pengwarnaan DNA
Ethidium bromide adalah pewarna yang mengikat DNA dengan tergelincir di antara nukleotida yang membentuk helix double DNA dalam proses yang dikenali sebagai interkalasi. Pewarna ini kemudiannya boleh diterangi dengan lampu ultraviolet, supaya DNA yang mana bromida etidium terikat dapat dilihat. Walau bagaimanapun, sekurang-kurangnya 1 nanogram DNA diperlukan untuk etidium bromida untuk dilihat dengan betul, oleh itu, ia adalah satu cara untuk mengesan DNA PCR-diperkuat. Walaupun murah dan digunakan secara meluas, ia juga merupakan kimia mutagenik yang diketahui menyebabkan kanser, jadi penggunaannya di makmal sangat dikawal selia dan banyak saintis bergerak menggunakan alternatif yang kurang toksik.