Begitu juga dengan menggunakan mana-mana instrumen saintifik, anda perlu memastikan instrumen itu berada dalam keadaan baik sebelum menggunakannya untuk menganalisis sampel. Memeriksa tindak balas instrumen untuk sampel yang diketahui mengesahkan bahawa instrumen telah ditentukur dengan betul. Spectrophotometers memerlukan penentukuran berkala untuk memastikan tindak balas yang betul terhadap instrumen tersebut. Spektroskopi inframerah (IR) menggunakan polistirena sebagai piawaian penentukuran. Satu imbasan instrumen dengan sepotong polistirena dalam pemegang sampel akan mengesahkan kehadiran puncak yang dilihat pada spektrum IR dan keamatan relatif puncak.
Hidupkan spektrofotometer dan biarkan ia panas selama sekurang-kurangnya 10 minit. Waktu pemanasan diperlukan untuk sumber menstabilkan. Tanpa sumber yang stabil, anda tidak boleh bergantung pada spektrum yang diperolehi. Isyarat analitik bergantung kepada pengurangan sinaran sumber oleh sampel.
Jalankan piawaian penentukuran dengan meletakkan sekeping filem polistirena dalam pemegang sampel. Tanpa ujian dijalankan menggunakan sampel spektrum yang dikenali sebagai standard, anda tidak mempunyai kepastian bahawa spektrofotometer berfungsi dengan betul.
Dapatkan spektrum untuk sampel polistirena. Bandingkan spektrum dengan rujukan standard spektrum IR. Pastikan semua puncak dijangka wujud pada spektrum ujian. Lokasi puncak mesti selaras dengan panjang gelombang penyerapan.
Semak spektrum untuk memastikan bahawa kekuatan isyarat berada dalam 95 peratus maksimum untuk puncak terkuat. Jika puncak terkuat di dalam spektrum lebih kurang daripada skala penuh, laraskan pelemahan untuk menghantar kekuatan isyarat yang betul.
Kalibrasi spektrofotometer IR sering. Kekerapan minimum penentukuran harus termasuk imbasan sebelum dan satu selepas kerja anda untuk hari itu.