Kandungan
- Bagaimana Elektroforesis Gel berfungsi
- Prosedur Elektroforesis Asas
- Menentukan Panjang Fragmen Tidak Diketahui
Apabila ia datang untuk mengukur panjang serpihan DNA, yang jauh lebih kecil daripada sel, ahli mikrob memerlukan trik, dan yang paling mudah ialah elektroforesis gel. Kaedah ini bergantung kepada fakta bahawa serpihan DNA dikenakan, dan ia adalah alternatif kepada kaedah yang lebih mahal, seperti crystallography sinar-X, yang bertanggungjawab untuk penemuan struktur double helix DNA.
Bagaimana Elektroforesis Gel berfungsi
Oleh kerana molekul DNA dikenakan, mereka dipengaruhi oleh arus elektrik. Apabila anda menetapkannya dalam gel neutral dan meletakkan arus di gel, molekul-molekul berpindah ke arah elektrod positif (anoda). Oleh kerana molekul DNA yang mempunyai saiz yang berbeza membawa cas yang sama, yang lebih kecil bergerak lebih cepat, maka proses ini memisahkan molekul ke dalam band yang dapat dibandingkan dengan sampel ukuran yang diketahui.
Prosedur Elektroforesis Asas
Gel biasanya dibuat daripada agarose, polisakarida yang apabila dipanaskan dalam larutan penampal membentuk gel separa pepejal, sedikit poros. Pada satu ketika, gel membentuk lekapan kecil bernama telaga di mana penyelidik meletakkan sampel DNA di bawah kajian, bersama-sama dengan sampel rujukan panjang diketahui, dipanggil tangga DNA. Panjang serpihan tangga telah ditentukan oleh kaedah lain, seperti kristalografi sinar-X.
Apabila gel direndam dalam penyelesaian dan voltan yang digunakan, serpihan mula berpindah melalui gel - yang lebih kecil terlebih dahulu dan yang lebih besar, perlahan di belakang. Mereka akhirnya membentuk diri mereka sebagai band spektrum mengikut saiz.
Sebaik sahaja ini berlaku, penyelidik mematikan kuasa, membekalkan gel dengan pewarna DVA yang mengikat dan mengkaji spesimen di bawah cahaya ultraviolet. Menggunakan tangga sebagai rujukan, penyelidik boleh menentukan saiz setiap serpihan dalam band yang kelihatan. Hanya band yang boleh dilihat - serpihan DNA individu terlalu kecil untuk dilihat.
Menentukan Panjang Fragmen Tidak Diketahui
Kemungkinan bukan setiap kumpulan dalam pasangan sampel dengan kumpulan pada tangga, jadi untuk menentukan saiz serpihan yang tidak diketahui, saintis biasanya merancang graf. Pada paksi-x ialah jarak yang dilalui oleh setiap band dalam tangga dalam milimeter, manakala pada paksi-y ialah saiz setiap band. Apabila titik dihubungkan dengan lengkung, saiz mana-mana band boleh diekstrapolasi dari lengkung selepas mengukur jarak yang dilalui oleh band itu dalam milimeter.