Kandungan
Spektrofotometer digunakan untuk menentukan kepekatan sebatian tertentu, seperti protein, dalam larutan. Secara umum, cahaya bersinar melalui cuvette yang diisi dengan sampel. Jumlah cahaya yang diserap oleh sampel diukur. Oleh kerana sebatian menyerap cahaya dalam pelbagai spektrum yang berbeza, panjang gelombang yang betul mesti ditetapkan untuk analisis. Terdapat banyak cara untuk mengira kepekatan sampel yang tidak diketahui melalui spektrofotometri, namun menggunakan piawaian rujukan memberi ketepatan yang terbaik. Selain itu, piawaian juga menunjukkan jika spektrofotometer tidak berfungsi atau masalah lain dengan analisis.
Menghitung melalui Persamaan Jalur Lurus
Menganalisis standard rujukan pada awal analisis. Piawaian dikenali sebagai kepekatan dan digunakan untuk menentukur peralatan dan memeriksa ketepatan. Semua sampel hendaklah termasuk dalam lingkungan standard kerja. Jika tidak, maka sampel perlu dicairkan atau kepekatan standard meningkat.
Buat carta berselerak atau graf garis dengan tumpuan standard dan bacaan penyerapan. Kepekatan akan berada pada paksi-y, penyerapan pada paksi-x. Sebagai contoh, piawaian adalah 1 ppm, 2.5 ppm, dan 5 ppm. Penyerapan yang diberikan adalah 1 ppm = .25, 2.5 ppm = .5, dan 5 ppm = .75.
Format garis trend untuk memaparkan persamaan pada graf. Persamaan akan menunjukkan formula y = mx + b. Sebagai contoh, menggunakan standard dalam langkah 2 persamaan ialah y = .1224x + 0.1531. Kebanyakan garis trend dipintas pada sifar, tetapi ia bergantung kepada kaedah analisis dan nilai R-kuadrat.
Menganalisis sampel yang tidak diketahui dan bacaan bacaan penyerapan.
Gunakan persamaan (y = mx + b) untuk menentukan kepekatan sampel.
Memahami Persamaan Jalur Lurus
Biarkan "Y" sama dengan kepekatan. Inilah yang akan diselesaikan.
Biarkan "X" sama dengan penyerapan sampel. Ini adalah penyerapan yang diukur oleh spektrofotometer.
Benarkan "" sama dengan cerun dan "b" untuk menyamai y-pencegahan. Kedua-duanya diberikan, namun jika garis trend dipaksa melalui 0, maka "b" akan menjadi 0.
Selesaikan tumpuan. Menggunakan contoh di langkah 3, gantikan "x" sebagai penyerapan yang diberikan .563. Oleh itu:
y = .1224 (.563) + 0.1531
y (kepekatan) = .222011