Kandungan
Noda Gram adalah prosedur pewarnaan berbeza yang menunjukkan bakteria mana Gram-positif atau Gram-negatif berdasarkan warna noda mereka. Alkohol aseton adalah satu reagen yang digunakan dalam proses ini untuk memberikan perbezaan warna. Bakteria gram-positif mempunyai lapisan peptidoglycan tebal dan noda ungu, sementara mikroorganisma Gram-negatif mempunyai sedikit lapisan peptidoglycan dan merah jambu noda.
Violet Stain-Crystal Primer
Sebaik sahaja slaid sampel bakterinya disediakan, violet kristal digunakan untuk mencemarkan sampel terlebih dahulu. Pada ketika ini bakteria Gram-positif dan Gram-negatif akan kelihatan ungu. Biasanya kristal ungu diterapkan pada slaid selama 30 saat sebelum membasuh apa-apa noda yang berlebihan dengan air. Violet kristal boleh mematuhi sedikit lapisan peptidoglycan supaya tidak semua noda primer akan dibersihkan dengan air.
Mordant-Iodine
Iodin kemudian ditambah kepada sampel selama satu minit. Ia berfungsi sebagai mordan, yang berfungsi untuk memperbaiki pewarna dalam proses pewarnaan. Iodine melakukan fungsi ini dengan mengikat kepada kristal ungu dan membuat kompleks yang tidak larut yang mematuhi lebih baik dengan lapisan peptidoglycan tebal yang terdapat dalam sel-sel bakteria Gram-positif daripada hanya ungu kristal sahaja. Tidak ada langkah pencucian dengan air selepas menambah yodium.
Decolorizer-Alkohol
Sama ada aseton atau alkohol etil boleh digunakan sebagai agen decolorizing. Alkohol membubarkan lipid yang terdapat di dalam membran sel luar bakteria Gram-negatif, yang membolehkan kompleks kristal ungu-iodine membocorkan lapisan peptidoglycan yang lebih nipis. Alkohol ditambah selama 10 hingga 20 saat; ia dituangkan ke atas slaid sehingga semua iodin dibasuh dan larian tidak berwarna. Pada ketika ini dalam proses Grain noda, bakteria Gram-negatif tidak berwarna manakala bakteria Gram-positif masih mengekalkan ungu kristal. Setelah selesai slaid perlu dibilas dengan air untuk menghentikan kesan memutihkan warna.
Counterstain-Safranin
Safranin kemudiannya ditambah untuk meningkatkan keterlihatan dan kontras dengan bakteria Gram negatif yang tidak berwarna. Noda menjadikan bakteria ini kelihatan merah jambu di bawah mikroskop. Oleh kerana noda ditambah ke keseluruhan sampel, ia juga menyerupai bakteria Gram-positif juga, tetapi warna gelap ungu kristal menyembunyikan warna pink safranin yang lebih ringan. Setelah sampel slaid dibanjiri dengan safranin selama satu minit, air digunakan untuk membasuh apa-apa noda berlebihan yang tidak mematuhi sel-sel bakteria.