Kandungan
Kromatografi cecair prestasi tinggi adalah teknik untuk analisis makmal campuran. Jenis kromatografi yang cekap yang menggunakan tekanan tinggi, bukan sekadar graviti, untuk melancarkan sampel campuran melalui lajur. Sampel disuntik, maka pam yang mengandungi tekanan tinggi membantu menggerakkan sampel di sepanjang lajur yang dibungkus, di mana ia dipisahkan menjadi komponen individu. Pemisahan ini kemudian dianalisis oleh pengesan untuk menghasilkan keputusan.
Tapak Suntikan
Untuk disuntik ke dalam HPLC, sampel mestilah terlebih dahulu dibubarkan dalam pelarut cecair polar, sebaiknya satu dengan spektrum HPLC yang diketahui supaya datanya dapat dibezakan dari sampel. Larutan cecair yang mengandungi sampel diletakkan di dalam instrumen dan dihantar ke dalam lajur. Lokasi sebenar tapak suntikan bergantung pada jenama instrumen. Dalam kebanyakan kes, proses suntikan automatik, tetapi dalam sesetengah kes, pekerja makmal mesti menyuntik sampel menggunakan jarum jarum suntik kecil.
Komponen Pam
Komponen pam unit HPLC diperlukan kerana ia memberikan tekanan yang mendorong sampel melalui lajur. Kekuatan pam berbeza-beza, tetapi yang berkuasa boleh menghasilkan tekanan sehingga 6,000 psi, atau pon per inci persegi, yang digunakan selepas sampel disuntik. Hal ini membolehkan sampel melewati lajur dengan lebih cepat dan efisien daripada jika menetes melalui hanya menggunakan gaya graviti.
Penerangan ruangan
Kelajuan yang meningkat sampel yang dilalui melalui tiang dengan pam membolehkan penggunaan jenis lajur yang berbeza daripada yang digunakan dalam kromatografi cecair mudah. Bahan pembungkusan dalam lajur boleh mempunyai saiz zarah yang lebih kecil, yang meningkatkan luas permukaan dan oleh itu membantu interaksi sampel dengan lajur. Kebanyakan tiang HPLC berfungsi melalui kekutuban. Sampel dibubarkan dalam pelarut polar, dan lajur terdiri daripada kebanyakan hidrokarbon bukan polar. Bahagian kutub molekul sampel melewati lajur dengan sangat cepat kerana mereka terutama berinteraksi dengan pelarut, sedangkan komponen-komponen bukan polar berlarutan dalam lajur, membentuk interaksi lemah dengan komponen lajur. Oleh itu, komponen-komponen sampel keluar dari lajur agar dari kebanyakan kutub ke kebanyakan kutub.
Fungsi Pengesan
Pengesan juga berbeza mengikut jenis instrumen HPLC yang digunakan. Walau bagaimanapun, kebanyakan fungsi dengan cara asas yang sama. Satu sumber cahaya ultraviolet bersinar pada komponen sampel yang dipisahkan apabila mereka keluar dari lajur. Sebatian kebanyakan organik menyerap sejumlah cahaya, sehingga mereka melewati rasuk cahaya yang digunakan, pengesan dapat mengambil jumlah cahaya yang diserap. Pengesan juga merekodkan masa pengekalan komponen berdasarkan perintah di mana mereka keluar dari lajur. Keluaran ini kemudiannya boleh dianalisis berdasarkan kawasan puncak untuk menentukan sifat sebenar komponen sampel.