Kandungan
- TL; DR (Terlalu Panjang, Tidak Baca)
- Apakah Elektroforesis?
- Penyediaan Gel Tidak Memuaskan
- Terlalu Banyak Contoh
- Sampel Kualiti Tidak Sihat
Pernahkah anda tertanya-tanya bagaimana saintis mengkaji serpihan kecil seperti DNA anda? Satu kaedah elektroforesis gel. Walaupun elektroforesis biasanya menghasilkan jalur yang jelas dan mudah dibaca sesuai untuk penafsiran saintifik, hasil smeared kadang-kadang mengaburkan data.
TL; DR (Terlalu Panjang, Tidak Baca)
Elektroforesis gel membolehkan saintis memvisualisasikan sampel dicerna dan mengukur saiz serpihan. Keluarkan hasil daripada gel agarose yang tidak betul, muatkan sampel yang tidak terurai ke dalam telaga atau menggunakan sampel berkualiti rendah.
Apakah Elektroforesis?
Gel elektroforesis adalah cara untuk saintis memvisualisasikan sampel dicerna molekul kecil seperti DNA dan menganggarkan saiz serpihan tersebut. Untuk melakukan elektroforesis, saintis menyediakan gel dengan menangguhkan agarose dalam air mendidih. Pempolimeran yang dihasilkan menghasilkan polimer gula pasir sehingga gel kelihatan sedikit seperti web labah-labah di peringkat kimia.
Para saintis menggunakan instrumen memotong untuk membentuk telaga dalam gel supaya mereka dapat memuat sejumlah kecil sampel yang dicerna ke telaga. Menghidupkan mesin menyebabkan elektrik berjalan melalui gel, dan serpihan dalam sampel mula bergerak dari telaga ke bahagian lain gel. Oleh kerana gel adalah seperti web, serpihan kecil bergerak melalui matriks dengan cepat, sementara serpihan yang lebih besar mengambil masa lebih lama untuk mendaki melalui matriks. Apabila selesai, gel mengandungi jalur gelap yang mewakili sejauh mana serpihan yang berbeza mengembara. Para saintis mengukur band ini dan menggunakan pengiraan logaritma untuk menentukan saiz setiap serpihan berdasarkan sejauh mana ia bermigrasi.
Para saintis berharap untuk band-band yang jelas, tetapi kadang-kadang band-band itu mengalir. Penyakit ini biasanya disebabkan oleh gel yang kurang disediakan, memuat sampel yang tidak terhirup ke telaga atau sampel berkualiti rendah.
Penyediaan Gel Tidak Memuaskan
Apabila ia datang kepada keputusan yang dihiris, salah satu penyebabnya adalah gel yang kurang disediakan. Gel yang memuaskan polimer merata, menghasilkan satu matriks seragam sepanjang gel dalam dulang pemutus. Jika sebahagian daripada gel - selalunya separuh lebih rendah - set sebelum penamat saintis menuangkan keseluruhan dulang, gel yang dihasilkan akan menjadi tidak seimbang dan menghasilkan hasil yang dioleskan.
Terlalu Banyak Contoh
Sebelum memuat sampel ke dalam telaga, sampel tersebut mestilah mencairkan cukup untuk mengalir melalui gel tanpa meluap telaga. Sekiranya sampel yang dimuatkan terlalu tertumpu kerana saintis terlupa mencairkan atau menggunakan faktor penyerapan yang tidak betul, serpihan akan terlalu besar untuk telaga dan menghasilkan peleburan.
Sampel Kualiti Tidak Sihat
Penyelewengan juga disebabkan oleh kualiti sampel yang lemah. Sebagai contoh, sampel DNA yang tercemar dengan protein atau yang mengandungi terlalu banyak garam boleh menghasilkan peleburan. Sampel yang terdegradasi atau dinamik juga menghasilkan keputusan yang lemah, termasuk band yang dilapisi.
Elektroforesis Gel adalah cara yang luar biasa untuk saintis untuk menggambarkan sampel yang dicerna dan menentukan saiz serpihan. Penyediaan yang baik dari kedua-dua gel dan sampel meminimumkan kemungkinan melicinkan dan menghasilkan band yang jelas sesuai untuk tafsiran saintifik.