Kandungan
- Bagaimana Buffer berfungsi
- Keperluan Penimbal
- Memilih Penampan Appopriate
- Bagaimana Mengubah pH penimbal
- Contoh Penghalang Biologi
Dalam sel dan organisma hidup, cecair yang mengelilingi dan dalam sel disimpan pada pH yang tetap. PH dalam sistem ini sering penting bagi reaksi biokimia yang berlaku di dalam organisma. Untuk mengkaji proses biologi di makmal, saintis menggunakan buffer untuk mengekalkan pH yang betul semasa eksperimen. Banyak buffer biologi pada asalnya digambarkan oleh Baik dan rakan sekerja pada tahun 1966 dan masih digunakan di makmal hari ini.
Bagaimana Buffer berfungsi
Penimbal hanyalah penyelesaian yang mengandungi asid lemah dan asas konjugasi. Apabila asid ditambah kepada penampan, ia bertindak balas dengan asas konjugasi yang membuat asid lemah dan tidak menjejaskan pH larutan.
Keperluan Penimbal
Beberapa ciri membuat penimbal biologi berkesan. Mereka harus larut dalam air, tetapi tidak larut atau larut minima dalam pelarut organik. Penimbal tidak boleh melepasi membran sel, kerana ini boleh menjejaskan tingkah laku sel. Buffer harus tidak toksik, tidak boleh menyerap radiasi UV dan harus tetap lengai dan stabil sepanjang proses eksperimen. Suhu dan komposisi ionik tidak boleh mengubah kapasiti pH atau penampungan.
Memilih Penampan Appopriate
Penampan yang dipilih harus mempunyai pKa dalam jangkauan optimum untuk proses yang sedang dipelajari. Penampan dengan pKa yang lebih tinggi adalah sesuai jika terdapat peningkatan dalam pH semasa percubaan, dan sebaliknya jika pH dijangka menurun. Kepekatan buffer harus dioptimumkan, kerana kepekatan yang lebih tinggi daripada 25mM mungkin mempunyai kapasiti penyerapan yang lebih baik tetapi boleh menghalang aktiviti selular seperti enzim. Kaedah ini juga menentukan penampan yang digunakan; contohnya, dalam elektroforesis, penampan dengan kekuatan ionik yang rendah adalah sesuai untuk mencegah matriks gel dari pemanasan.
Bagaimana Mengubah pH penimbal
Kerana pH dapat mengubah perubahan suhu, saintis harus menguji pH buffer pada suhu di mana mereka akan menjalankan eksperimen. Tris adalah penyangga yang mudah terdedah kepada perubahan suhu pH. Semua meter pH perlu ditentukur pada suhu kerja. Aditif juga boleh mengubah pH, membuat pengujian semula diperlukan. Untuk mengubah asid pH, biasanya asid hidroklorik, atau asas, biasanya natrium atau kalium hidroksida, ditambah; ini perlu dilakukan perlahan-lahan untuk mengelakkan ketidakaktifan atau perubahan kimia dalam penampan.
Contoh Penghalang Biologi
Penampan TE, iaitu 10 mM Tris · HCl dan 1 mM EDTA, adalah sesuai untuk beberapa nilai pH untuk penyimpanan asid nukleik. Elektroforesis adalah kaedah umum untuk mengkaji protein atau asid nukleik; proses ini menggunakan sejumlah buffer, termasuk Tris-acetate-EDTA, Tris-glycine dan Tris-borate-EDTA buffer. Penampan ini menghalang pemanasan gel matriks dan boleh mengandungi aditif seperti urea dan SDS, bergantung kepada siasatan.